半制備/制備型液相色譜柱是介于分析型和制備型之間的一種液相色譜柱,它能夠處理比分析型色譜柱更大的樣品量,同時(shí)提供比制備型色譜柱更高的分辨率和更短的分析時(shí)間。而制備型高效液相色譜柱則專為大規(guī)模制備高純度化合物而設(shè)計(jì),能夠處理大量的樣品,并分離出足夠數(shù)量的目標(biāo)化合物。
兩者的主要區(qū)別在于其處理樣品的能力和分離效率。半制備型色譜柱適用于中等規(guī)模的樣品制備,而制備型色譜柱則適用于大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)或需要大量高純度化合物的研究。此外,半制備型色譜柱通常具有更高的分辨率和更快的分析速度,但處理樣品的能力相對(duì)較低;而制備型色譜柱雖然分辨率可能稍低,但能夠處理更多的樣品。
半制備/制備型液相色譜柱的檢定方法:
1.外觀檢查
-檢查柱體:查看色譜柱的外觀是否有損壞,如柱體是否有裂痕、變形,接頭是否松動(dòng)或損壞等。若柱體出現(xiàn)問題,可能會(huì)影響色譜柱的性能甚至導(dǎo)致泄漏。
-檢查填充情況:對(duì)于一些半透明的色譜柱,可以觀察柱內(nèi)填充是否均勻。填充不均勻可能會(huì)導(dǎo)致分離效果不佳、峰形異常等問題。
2.系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)
-理論塔板數(shù)測(cè)定:選擇一種合適的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),按照既定的色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣分析。通過測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在色譜柱上的保留時(shí)間和峰寬,計(jì)算出理論塔板數(shù)
-分離度測(cè)定:選取含有多種組分的混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),使其在色譜柱上分離。根據(jù)各組分的保留時(shí)間和峰寬,計(jì)算相鄰兩組分的分離度。分離度應(yīng)符合規(guī)定的要求,以確保色譜柱能夠有效分離目標(biāo)化合物。比如,在藥物制備中,要求目標(biāo)藥物與其他雜質(zhì)的分離度應(yīng)大于1.5。
-重復(fù)性試驗(yàn):連續(xù)多次進(jìn)樣相同的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),觀察其峰面積、保留時(shí)間等參數(shù)的一致性。重復(fù)性良好說明色譜柱的性能穩(wěn)定,能夠滿足定量分析的要求。
3.壓力測(cè)試:將色譜柱連接到液相色譜系統(tǒng)中,逐步增加流動(dòng)相的壓力,觀察色譜柱能否承受規(guī)定的壓力范圍。如果壓力超過色譜柱的承受限度,可能會(huì)導(dǎo)致柱床壓縮、損壞填料等問題。同時(shí),檢查在高壓下色譜柱是否有泄漏現(xiàn)象。